细胞接种量计算器
选择培养板、培养皿或培养瓶,以 cells/cm² 或每孔细胞数设定所需的密度,并输入细胞悬液的浓度。计算器会返回整个接种混合液中悬液与新鲜培养基的用量、每孔应加入的量,以及所需的细胞总数。完全在您的浏览器中运行。免费,无需注册。
如果您的培养板制造商给出的数值与对照表不同,请使用其数值。
根据您的细胞计数得出,例如血球计数板计数。
接种后细胞加培养基的总量。
补偿移液损失;通常取 10%。
结果
0.5016
需取用的细胞悬液(mL)
12.7
需加入的新鲜培养基(mL)
38,000
每孔或每个容器的细胞数
38
每孔或每个容器的悬液量(µL)
501,600
所需细胞总数
20,000
实际达到的密度 (cells/cm²)
接种混合液
| 成分 | 体积(mL) |
|---|---|
| 细胞悬液 | 0.5016 |
| 新鲜培养基 | 12.7 |
| 接种混合液合计 | 13.2 |
轻轻混匀,然后向 12 个孔或容器中各分装 1 mL。
计算过程
每个容器的细胞数 = 20,000 cells/cm² × 1.9 cm² = 38,000
悬液 = 所需细胞数 ÷ 浓度 = 501,600 ÷ 1 × 10⁶ = 0.5016 mL
如何使用细胞接种量计算器
- 1. 选择培养容器。 生长面积来自计算器中的对照表。如果您的培养板面积不同,请在覆盖框中输入。
- 2. 设定密度。 输入 cells/cm²(在不同规格之间切换时很有用),或输入每孔细胞数,这也是多数方案的写法。容器旁边的按钮会填入 Thermo Fisher 给出的起始细胞数。
- 3. 输入悬液。 使用您计数得出的浓度,以及细胞加入后您希望每孔达到的总体积。为补偿移液损失,可以添加额外配制量。
- 4. 配制接种混合液。 合并悬液与新鲜培养基所示的用量,轻轻混匀,然后向每个孔中分装相同的量。
计算方法
每孔细胞数
每孔细胞数 = 密度(cells/cm²)× 生长面积(cm²)
悬液
悬液体积(mL)= 所需细胞总数 ÷ 悬液中的 cells/mL
培养基
新鲜培养基 = 接种混合液体积 − 悬液体积
接种混合液在一个管中为所有孔一次配制,配制的孔数为 N × (1 + 额外比例),以免最后一个孔不足;悬液在其中只占很小的一部分。一次配制混合液再分装,而不是逐孔加入细胞,既更快,孔间也更均匀。请先计数悬液(血球计数板细胞计数计算器可将方格计数换算为 cells/mL),并在每一步之前充分重悬,因为细胞会迅速沉降。
生长面积与起始细胞数
计算器中的容器对照表取自 Thermo Fisher Scientific 的 Useful Numbers for Cell Culture(Gibco Cell Culture Basics),其中的起始细胞数是用 HeLa 细胞测得的。代表性数值如下:
| 容器 | 生长面积(cm²) | 起始细胞数 | 生长培养基(mL) |
|---|---|---|---|
| 6 孔板 | 9.6 | 每孔 0.3 × 10⁶ | 1–3 |
| 12 孔板 | 3.5 | 每孔 0.1 × 10⁶ | 1–2 |
| 24 孔板 | 1.9 | 每孔 0.05 × 10⁶ | 0.5–1.0 |
| 96 孔板 | 0.32 | 每孔 0.01 × 10⁶ | 0.1–0.2 |
| 100 mm 培养皿 | 56.7 | 2.2 × 10⁶ | 12 |
| T-75 培养瓶 | 75 | 2.1 × 10⁶ | 8–15 |
请将起始细胞数视为起点,而非规则:合适的密度取决于细胞类型、实验持续时间以及细胞分裂的快慢。不同厂商的生长面积也略有差异,因此请核对产品说明书,并在您的容器面积不同时覆盖面积数值。Corning 建议每 cm² 使用 0.2–0.3 mL 培养基,可作为培养瓶和培养皿的有用交叉核对,但这一规则不适用于微孔板的小孔,因为弯月面会改变比例。
示例:24 孔板的 12 个孔
您希望在 24 孔板的 12 个孔中达到 20,000 cells/cm²,每孔加至 1 mL,悬液浓度为 1 × 10⁶ cells/mL,额外配制量为 10%(计算器的默认值)。
- 每孔细胞数:20,000 × 1.9 = 38,000,即每孔需要 38 µL 悬液。
- 混合液的孔数:12 × 1.1 = 13.2 孔:共 13.2 mL,其中含有 38,000 × 13.2 = 501,600 个细胞。
- 悬液:501,600 ÷ 1,000,000 = 0.5016 mL。新鲜培养基:13.2 − 0.5016 = 12.7 mL。
- 每孔分装 1 mL 混合液。
悬液过稀时
如果您的细胞浓度为 10,000 cells/mL,要向一孔中加入 38,000 个细胞,需要 3.8 mL 悬液,超过该孔可容纳的 1 mL。计算器会提示此问题,而不会报告负数的培养基用量。请以较低的速度离心沉降细胞(离心机转速转 RCF 计算器可将方案中的 × g 换算为您转子所需的转速),弃去上清,再用更少的体积重悬,然后在接种前重新计数。
常见错误
- 计数死细胞。 应以活细胞计数为准进行接种,并使用台盼蓝计数得出的活力。
- 单位混淆。 在 24 孔板中,按 cells/cm² 与按每孔细胞数计算,结果相差 1.9 倍。请核对方案所指的是哪一种。
- 未重新混匀。 细胞数分钟内即会沉降,因此从未混匀的管顶部吸取的移液体积中细胞含量偏低。
- 接种边缘孔。 板边缘孔的蒸发会改变浓度;许多实验室会用缓冲液或培养基填充这些孔,而不接种细胞。
- 忽略传代与细胞类型。 适合快速生长的 HeLa 细胞的密度,会使生长较慢或具有接触抑制的细胞系过度生长。
常见问题
- 如何计算每孔应接种的细胞数?
- 将目标密度(cells/cm²)乘以该孔的生长面积(cm²)。24 孔板的一个孔约有 1.9 cm²,因此 20,000 cells/cm² 即每孔 38,000 个细胞。如果您的方案直接给出每孔细胞数,请输入该数值。
- 如何计算需要加入的细胞悬液体积?
- 用所需细胞数除以悬液中每毫升的细胞数。从 1 × 10⁶ cells/mL 的悬液中取 38,000 个细胞,需要 0.038 mL,即 38 µL。若孔数较多,请配制一份接种混合液再进行分装。
- 24 孔板应接种多少细胞?
- Thermo Fisher 的对照表建议 HeLa 细胞每孔约 50,000 个,约合 26,000 cells/cm²。正确的数量取决于细胞系以及实验持续时间:培养时间较长或生长较快的细胞用量应较少,若细胞需要次日即达到汇合,则应使用更多。
- T-75 培养瓶汇合时有多少细胞?
- Thermo Fisher 列出 HeLa 细胞在 T-75 培养瓶(75 cm²)汇合时约为 8.4 × 10⁶ 个,大约 112,000 cells/cm²。这随细胞类型和大小差异很大,因此仅作粗略参考。
- 为什么要在接种混合液中增加额外体积?
- 液体会附着在离心管壁和移液器吸头上,因此仅按 N 个孔配制的混合液会使最后一个孔不足。通常加 10%;若孔数很少,可以改为多配制一个孔的量。
- 培养基体积会改变细胞数吗?
- 不会。每孔的细胞数由密度和面积决定。接种所用的体积只改变细胞的稀释程度,以及悬液在该体积中所占的比例。