Celzaaiingcalculator
Kies de plaat, schaal of kolf, stel de gewenste dichtheid in als cellen per cm² of cellen per well, en voer de concentratie van je celsuspensie in. De calculator geeft het volume suspensie en vers medium voor het hele zaaimengsel, hoeveel je in elke well doet, en het totale aantal cellen dat je nodig hebt. Draait volledig in je browser. Gratis, zonder registratie.
Gebruik het cijfer van je fabrikant als het afwijkt van de tabel.
Uit je celtelling, bijvoorbeeld met een hemocytometer.
Cellen plus medium zodra ze zijn gezaaid.
Dekt pipetteerverlies; 10% is gebruikelijk.
Resultaten
0,5016
Celsuspensie om te nemen (mL)
12,7
Vers medium toe te voegen (mL)
38.000
Cellen per well of vat
38
Suspensie per well of vat (µL)
501.600
Totaal benodigde cellen
20.000
Bereikte dichtheid (cellen/cm²)
Zaaimengsel
| Onderdeel | Volume (mL) |
|---|---|
| Celsuspensie | 0,5016 |
| Vers medium | 12,7 |
| Totaal zaaimengsel | 13,2 |
Meng voorzichtig en verdeel daarna 1 mL over elk van de 12 wells of vaten.
De berekening
cellen per vat = 20.000 cellen/cm² × 1,9 cm² = 38.000
suspensie = benodigde cellen ÷ concentratie = 501.600 ÷ 1 × 10⁶ = 0,5016 mL
Zo gebruik je de celzaaiingcalculator
- 1. Kies het vat. Het groeioppervlak komt uit de tabel in de calculator. Wijkt het oppervlak van je plaat af, typ het dan in het vak voor een afwijkend oppervlak.
- 2. Stel de dichtheid in. Voer cellen per cm² in (handig als je tussen formaten wisselt) of cellen per well, zoals veel protocollen die aangeven. De knop naast het vat vult het startaantal van Thermo Fisher in.
- 3. Voer de suspensie in. Gebruik de concentratie uit je telling, en het totale volume dat je in elke well wilt hebben zodra de cellen erin zitten. Voeg extra mengsel toe om pipetteerverlies te dekken.
- 4. Maak het zaaimengsel. Combineer de volumes die bij de suspensie en het verse medium staan, meng voorzichtig en verdeel dezelfde hoeveelheid over elke well.
De rekenregels
Cellen per well
cellen per well = dichtheid (cellen/cm²) × groeioppervlak (cm²)
Suspensie
volume suspensie (mL) = benodigde cellen totaal ÷ cellen/mL in de suspensie
Medium
vers medium = volume van het zaaimengsel − suspensie
Het zaaimengsel maak je in één buis voor alle wells, voor N × (1 + extra) wells zodat de laatste niet tekortkomt, en de suspensie vormt er maar een klein deel van. Eén mengsel maken en verdelen, in plaats van de cellen per well afzonderlijk toe te voegen, is sneller en levert veel gelijkmatiger wells op. Tel de suspensie eerst (een Hemocytometer-celtelcalculator zet tellingen per hokje om in cellen/mL), en resuspendeer goed vóór elke stap, want cellen bezinken snel.
Groeioppervlakken en startaantallen
De vattabel van de calculator komt uit de Useful Numbers for Cell Culture (Gibco Cell Culture Basics) van Thermo Fisher Scientific, waarin de startaantallen zijn gemeten met HeLa-cellen. Representatieve waarden:
| Vat | Groeioppervlak (cm²) | Startaantal | Groeimedium (mL) |
|---|---|---|---|
| 6-wellplaat | 9,6 | 0,3 × 10⁶ per well | 1–3 |
| 12-wellplaat | 3,5 | 0,1 × 10⁶ per well | 1–2 |
| 24-wellplaat | 1,9 | 0,05 × 10⁶ per well | 0,5–1,0 |
| 96-wellplaat | 0,32 | 0,01 × 10⁶ per well | 0,1–0,2 |
| 100 mm-schaal | 56,7 | 2,2 × 10⁶ | 12 |
| T-75-kolf | 75 | 2,1 × 10⁶ | 8–15 |
Behandel de startaantallen als een beginpunt, niet als een regel: de juiste dichtheid hangt af van het celtype, hoe lang het experiment duurt en hoe snel de cellen delen. Groeioppervlakken verschillen ook een beetje per fabrikant, dus controleer het productblad en pas het oppervlak aan als het cijfer van jouw vat afwijkt. De richtlijn van Corning van 0,2–0,3 mL medium per cm² is een bruikbare controle voor kolven en schalen, al geldt die niet voor de kleine wells van microplaten, waar de meniscus de verhouding verandert.
Uitgewerkt voorbeeld: twaalf wells van een 24-wellplaat
Je wilt 20.000 cellen/cm² in twaalf wells van een 24-wellplaat, elk gevuld tot 1 mL, uit een suspensie van 1 × 10⁶ cellen/mL, met 10% extra mengsel (de standaardinstellingen van de calculator).
- Cellen per well: 20.000 × 1,9 = 38.000, dat is 38 µL suspensie per well.
- Mengsel voor 12 × 1,1 = 13,2 wells: 13,2 mL in totaal, met 38.000 × 13,2 = 501.600 cellen.
- Suspensie: 501.600 ÷ 1.000.000 = 0,5016 mL. Vers medium: 13,2 − 0,5016 = 12,7 mL.
- Verdeel 1 mL van het mengsel over elke well.
Wanneer de suspensie te verdund is
Als je cellen op 10.000 cellen/mL zitten, heb je voor 38.000 cellen in één well 3,8 mL suspensie nodig, meer dan de 1 mL die de well bevat. De calculator meldt dit in plaats van een negatieve hoeveelheid medium te geven. Centrifugeer de cellen zachtjes (de Centrifugecalculator: rpm naar RCF zet de × g van een protocol om naar het toerental voor je rotor), gooi het supernatant weg, suspendeer opnieuw in een kleiner volume en tel opnieuw voordat je zaait.
Veelgemaakte fouten
- Dode cellen meetellen. Zaai op basis van het aantal levende cellen, en gebruik de levensvatbaarheid uit de telling met trypaanblauw.
- De eenheden door elkaar halen. Cellen per cm² en cellen per well verschillen in een 24-wellplaat een factor 1,9. Controleer welke het protocol bedoelt.
- Niet opnieuw mengen. Cellen bezinken binnen enkele minuten, dus een pipet uit de bovenkant van een niet gemengde buis bevat te weinig cellen.
- De randwells zaaien. Verdamping in de buitenste wells van een plaat verandert de concentraties; veel labs vullen ze met buffer of medium en zaaien ze niet.
- Passage en celtype vergeten. Een dichtheid die past bij snel groeiende HeLa-cellen, laat langzamer groeiende of contactgeremde lijnen overgroeien.
Veelgestelde vragen
- Hoe bereken je hoeveel cellen je per well zaait?
- Vermenigvuldig de gewenste dichtheid in cellen/cm² met het groeioppervlak van de well in cm². Een well van een 24-wellplaat heeft ongeveer 1,9 cm², dus 20.000 cellen/cm² betekent 38.000 cellen per well. Als je protocol cellen per well direct geeft, voer je dat in.
- Hoe bereken je het volume celsuspensie dat je moet toevoegen?
- Deel het aantal cellen dat je nodig hebt door het aantal cellen per milliliter in je suspensie. 38.000 cellen uit een suspensie van 1 × 10⁶ cellen/mL is 0,038 mL, of 38 µL. Voor veel wells maak je één zaaimengsel en verdeel je dat.
- Hoeveel cellen moet ik zaaien in een 24-wellplaat?
- De tabel van Thermo Fisher geeft ongeveer 50.000 cellen per well voor HeLa-cellen, wat ongeveer 26.000 cellen/cm² is. Het juiste aantal hangt af van de cellijn en hoe lang het experiment duurt: gebruik minder cellen voor een langere kweek of snelle groeiers, en meer als de cellen de volgende dag confluent moeten zijn.
- Hoeveel cellen zitten er in een confluente T-75-kolf?
- Thermo Fisher noemt ongeveer 8,4 × 10⁶ HeLa-cellen bij confluentie in een T-75-kolf (75 cm²), grofweg 112.000 cellen/cm². Dit verschilt sterk per celtype en celgrootte, dus gebruik het alleen als ruwe richtlijn.
- Waarom extra volume toevoegen aan het zaaimengsel?
- Vloeistof blijft achter aan de wanden van de buis en in de pipetpunt, dus een mengsel dat precies voor N wells is gemaakt, laat de laatste well tekortkomen. 10% extra is gebruikelijk; bij maar een paar wells maak je het mengsel voor één extra well.
- Verandert het mediumvolume het aantal cellen?
- Nee. Het aantal cellen per well wordt bepaald door de dichtheid en het oppervlak. Het volume waarin je zaait verandert alleen hoe verdund de cellen zijn, en hoeveel van dat volume de suspensie in beslag neemt.