細胞播種計算ツール
プレート、ディッシュ、フラスコを選び、播種密度を細胞/cm²またはウェルあたりの細胞数で設定し、細胞懸濁液の濃度を入力します。計算ツールは、播種混合液全体に必要な懸濁液と新しい培地の量、各ウェルに入れる量、必要な細胞の総数を示します。計算はすべてブラウザ内で行われます。無料で、登録は不要です。
メーカーの表の値と異なる場合は、その値を使ってください。
細胞の計数（たとえばヘモサイトメーター）から求めます。
播種後の細胞と培地を合わせた量です。
ピペット操作による損失を補います。10%が一般的です。
結果
0.5016
取る細胞懸濁液（mL）
12.7
加える新しい培地（mL）
38,000
ウェルまたは容器あたりの細胞数
38
ウェルまたは容器あたりの懸濁液（µL）
501,600
必要な細胞の総数
20,000
到達した密度 (細胞/cm²)
播種混合液
| 成分 | 容量（mL） |
|---|---|
| 細胞懸濁液 | 0.5016 |
| 新しい培地 | 12.7 |
| 播種混合液の合計 | 13.2 |
穏やかに混ぜてから、12 個のウェルまたは容器のそれぞれに 1 mL ずつ分注します。
計算の過程
ウェルまたは容器あたりの細胞数 = 20,000 細胞/cm² × 1.9 cm² = 38,000
懸濁液 = 必要な細胞数 ÷ 濃度 = 501,600 ÷ 1 × 10⁶ = 0.5016 mL
細胞播種計算ツールの使い方
- 1. 容器を選びます。 培養面積は計算ツールの表から取ります。プレートの面積が異なる場合は、上書きの欄に入力してください。
- 2. 密度を設定します。 細胞/cm²（フォーマットを変えるときに便利）またはウェルあたりの細胞数（多くのプロトコルはこの形で書かれています）を入力します。容器の横のボタンで、Thermo Fisherの開始数が入ります。
- 3. 懸濁液を入力します。 数えた細胞の濃度と、細胞を入れた後に各ウェルで欲しい総容量を入力します。ピペット操作による損失を補うために、余分な混合液を加えてください。
- 4. 播種混合液を作ります。 懸濁液と新しい培地について表示された量を合わせ、穏やかに混ぜてから、すべてのウェルに同じ量を分注します。
計算式
ウェルあたりの細胞数
ウェルあたりの細胞数 = 密度（細胞/cm²）× 培養面積（cm²）
懸濁液
懸濁液の容量（mL）= 必要な細胞の総数 ÷ 懸濁液中の細胞/mL
培地
新しい培地 = 播種混合液の容量 − 懸濁液
播種混合液は1本のチューブで、すべてのウェル分をまとめて作ります。最後のウェルが不足しないよう、N × (1 + 余分量) 個のウェル分を用意し、懸濁液は全体のごく一部にすぎません。各ウェルに個別に細胞を加えるのではなく、1つの混合液を作って分注するほうが速く、ウェル間のばらつきも大幅に小さくなります。懸濁液はまず数えてください（Hemocytometer Cell Count Calculatorで、方形の数から細胞/mLを求められます）。細胞はすぐに沈むので、どの工程の前にも十分に再懸濁してください。
培養面積と開始数
計算ツールの容器の表は、Thermo Fisher Scientific の Useful Numbers for Cell Culture（Gibco Cell Culture Basics）から取られており、開始数はHeLa細胞で測定されたものです。代表的な値は次のとおりです。
| 容器 | 培養面積（cm²） | 開始数 | 増殖培地（mL） |
|---|---|---|---|
| 6ウェルプレート | 9.6 | ウェルあたり 0.3 × 10⁶ | 1～3 |
| 12ウェルプレート | 3.5 | ウェルあたり 0.1 × 10⁶ | 1～2 |
| 24ウェルプレート | 1.9 | ウェルあたり 0.05 × 10⁶ | 0.5～1.0 |
| 96ウェルプレート | 0.32 | ウェルあたり 0.01 × 10⁶ | 0.1～0.2 |
| 100 mmディッシュ | 56.7 | 2.2 × 10⁶ | 12 |
| T-75フラスコ | 75 | 2.1 × 10⁶ | 8～15 |
開始数は出発点であり、規則ではありません。適切な密度は、細胞の種類、実験の期間、細胞が分裂する速さによって変わります。培養面積もメーカーによって少しずつ異なるので、製品仕様を確認し、お使いの容器の値が違うときには面積を上書きしてください。Corningの指針（フラスコやディッシュでは培地0.2～0.3 mL/cm²）は、照合の目安として役立ちます。ただし、マイクロプレートの小さなウェルには当てはまりません。メニスカスによって比が変わるからです。
具体例：24ウェルプレートの12ウェル
1 × 10⁶ 細胞/mLの懸濁液から、24ウェルプレートの12ウェルに、それぞれ1 mLずつ満たして20,000細胞/cm²で播きたいとします。余分な混合液は10%です（計算ツールの初期値）。
- ウェルあたりの細胞数：20,000 × 1.9 = 38,000個。これは懸濁液38 µLに当たります。
- 12 × 1.1 = 13.2ウェル分の混合液：合計13.2 mL、細胞数は38,000 × 13.2 = 501,600個。
- 懸濁液：501,600 ÷ 1,000,000 = 0.5016 mL。新しい培地：13.2 − 0.5016 = 12.7 mL。
- 各ウェルに播種混合液を1 mLずつ分注します。
懸濁液が薄すぎる場合
細胞が10,000細胞/mLなら、1ウェルに38,000個を入れるには3.8 mLの懸濁液が必要で、これはウェルの容量1 mLを超えます。計算ツールは、マイナスの培地量を示す代わりに、これを警告します。細胞を穏やかな速度で遠心して沈め（遠心機のRPM・RCF換算ツールで、プロトコルの×gをお使いのローターのrpmに換算できます）、上澄みを捨て、より少ない量に再懸濁してから、播種する前にもう一度数えてください。
よくある間違い
- 死細胞を数える。 播種は生細胞の数で行い、トリパンブルー法で数えた生存率を使ってください。
- 単位の混同。 24ウェルプレートでは、細胞/cm²とウェルあたりの細胞数は1.9倍違います。プロトコルがどちらを意味しているか確認してください。
- 混ぜ直しをしない。 細胞は数分で沈むので、混ぜていないチューブの上から取ったピペットには細胞が少なくなっています。
- 端のウェルへの播種。 プレートの外側のウェルでは蒸発によって濃度が変わるため、多くの研究室では緩衝液や培地を入れ、播種せずに残します。
- 継代数と細胞の種類を忘れる。 増殖の速いHeLa細胞に合う密度は、増殖の遅い細胞株や接触阻害を示す細胞株では過密になってしまいます。
よくある質問
- ウェルあたりに播く細胞数はどう計算しますか？
- 目標密度（細胞/cm²）に、そのウェルの培養面積（cm²）を掛けます。24ウェルプレートのウェルは約1.9 cm²なので、20,000細胞/cm²は1ウェルあたり38,000個になります。プロトコルがウェルあたりの細胞数を直接示している場合は、その値を入力してください。
- 加える細胞懸濁液の量はどう計算しますか？
- 必要な細胞数を、懸濁液の1 mLあたりの細胞数で割ります。1 × 10⁶ 細胞/mLの懸濁液から38,000個を取るなら0.038 mL、つまり38 µLです。多くのウェルに播く場合は、播種混合液を1つ作り、それを分けてください。
- 24ウェルプレートには何個の細胞を播くべきですか？
- Thermo Fisherの表では、HeLa細胞なら1ウェルあたり約50,000個、つまり約26,000細胞/cm²が示されています。適切な数は細胞株と実験の期間によって異なります。長い培養や増殖の遅い細胞には少なく、翌日にコンフルエントにしたい場合は多く播いてください。
- T-75フラスコでコンフルエントになるには何個の細胞がありますか？
- Thermo Fisherは、T-75フラスコ（75 cm²）でコンフルエントになったHeLa細胞を約8.4 × 10⁶個としています。つまり約112,000細胞/cm²です。細胞の種類や大きさによって大きく変わるので、目安としてのみ使ってください。
- 播種混合液に余分な量を加えるのはなぜですか？
- 液体は、チューブの壁やピペットチップに残って失われるので、ちょうどN個のウェル分で作った混合液では、最後のウェルが不足します。10%の余分量が一般的です。ウェルの数が少ない場合は、1つ余分なウェル分の混合液を作ってください。
- 培地の容量は細胞数を変えますか？
- いいえ。ウェルあたりの細胞数は、密度と面積で決まります。播種する容量は、細胞がどれだけ薄まるかと、その容量のうち懸濁液が占める割合を変えるだけです。