Kalkulator Penanaman Sel
Pilih pelat, cawan, atau labu, atur kepadatan yang Anda inginkan sebagai sel per cm² atau sel per sumuran, dan masukkan konsentrasi suspensi sel Anda. Kalkulator mengembalikan volume suspensi dan medium segar untuk seluruh campuran penanaman, jumlah yang harus dimasukkan ke setiap sumuran, dan total sel yang Anda butuhkan. Berjalan sepenuhnya di peramban Anda. Gratis, tanpa perlu mendaftar.
Gunakan angka dari pembuat wadah Anda jika berbeda dari tabel.
Dari hitungan sel Anda, misalnya dengan hemositometer.
Sel ditambah medium setelah ditanam.
Menutupi kehilangan saat pemipetan; 10% lazim digunakan.
Hasil
0,5016
Suspensi sel yang diambil (mL)
12,7
Medium segar yang ditambahkan (mL)
38.000
Sel per sumuran atau wadah
38
Suspensi per sumuran atau wadah (µL)
501.600
Total sel yang dibutuhkan
20.000
Kepadatan yang tercapai (sel/cm²)
Campuran penanaman
| Komponen | Volume (mL) |
|---|---|
| Suspensi sel | 0,5016 |
| Medium segar | 12,7 |
| Total campuran penanaman | 13,2 |
Campur perlahan, lalu tuangkan 1 mL ke masing-masing dari 12 sumuran atau wadah.
Perhitungannya
sel per wadah = 20.000 sel/cm² × 1,9 cm² = 38.000
suspensi = sel yang dibutuhkan ÷ konsentrasi = 501.600 ÷ 1 × 10⁶ = 0,5016 mL
Cara Menggunakan Kalkulator Penanaman Sel
- 1. Pilih wadahnya. Luas pertumbuhan berasal dari tabel di kalkulator. Jika luas pelat Anda berbeda, ketik di kotak penggantian luas.
- 2. Atur kepadatannya. Masukkan sel per cm² (berguna saat Anda berpindah antarformat) atau sel per sumuran, yang lazim ditulis dalam protokol. Tombol di samping wadah mengisi jumlah awal dari Thermo Fisher.
- 3. Masukkan suspensinya. Gunakan konsentrasi dari hitungan Anda, dan volume total yang Anda inginkan di setiap sumuran setelah sel dimasukkan. Tambahkan campuran tambahan untuk menutupi kehilangan saat pemipetan.
- 4. Buat campuran penanaman. Gabungkan volume suspensi dan medium segar yang ditampilkan, campur perlahan, lalu tuangkan jumlah yang sama ke setiap sumuran.
Aritmetikanya
Sel per sumuran
sel per sumuran = kepadatan (sel/cm²) × luas pertumbuhan (cm²)
Suspensi
volume suspensi (mL) = total sel yang dibutuhkan ÷ sel/mL dalam suspensi
Medium
medium segar = volume campuran penanaman − suspensi
Campuran penanaman dibuat dalam satu tabung untuk semua sumuran, untuk N × (1 + tambahan) sumuran agar sumuran terakhir tidak kekurangan, dan suspensi hanya mengisi sebagian kecil dari campuran itu. Membuat satu campuran lalu menuangkannya, alih-alih menambahkan sel ke setiap sumuran satu per satu, lebih cepat dan menghasilkan sumuran yang jauh lebih seragam. Hitung suspensinya terlebih dahulu (Hemocytometer Cell Count Calculator mengubah hitungan kotak menjadi sel/mL), dan suspensikan ulang dengan baik sebelum setiap langkah, karena sel mengendap dengan cepat.
Luas Pertumbuhan dan Jumlah Awal
Tabel wadah di kalkulator diambil dari Useful Numbers for Cell Culture milik Thermo Fisher Scientific (Gibco Cell Culture Basics), tempat jumlah awal diukur dengan sel HeLa. Nilai representatif:
| Wadah | Luas pertumbuhan (cm²) | Jumlah awal | Medium pertumbuhan (mL) |
|---|---|---|---|
| Pelat 6 sumuran | 9,6 | 0,3 × 10⁶ per sumuran | 1–3 |
| Pelat 12 sumuran | 3,5 | 0,1 × 10⁶ per sumuran | 1–2 |
| Pelat 24 sumuran | 1,9 | 0,05 × 10⁶ per sumuran | 0,5–1,0 |
| Pelat 96 sumuran | 0,32 | 0,01 × 10⁶ per sumuran | 0,1–0,2 |
| Cawan 100 mm | 56,7 | 2,2 × 10⁶ | 12 |
| Labu T-75 | 75 | 2,1 × 10⁶ | 8–15 |
Perlakukan jumlah awal sebagai titik awal, bukan aturan: kepadatan yang tepat bergantung pada jenis sel, berapa lama percobaan berlangsung, dan seberapa cepat sel membelah. Luas pertumbuhan juga sedikit berbeda antarpabrikan, jadi periksa lembar produk dan timpa luasnya jika angka wadah Anda berbeda. Panduan Corning sebesar 0,2–0,3 mL medium per cm² berguna sebagai pemeriksaan silang untuk labu dan cawan, meskipun tidak berlaku untuk sumuran kecil pada pelat mikro, tempat meniskus mengubah rasionya.
Contoh Kasus: Dua Belas Sumuran pada Pelat 24 Sumuran
Anda ingin 20.000 sel/cm² di dua belas sumuran pelat 24 sumuran, masing-masing diisi hingga 1 mL, dari suspensi 1 × 10⁶ sel/mL, dengan campuran tambahan 10% (nilai bawaan kalkulator).
- Sel per sumuran: 20.000 × 1,9 = 38.000, yaitu 38 µL suspensi per sumuran.
- Campuran untuk 12 × 1,1 = 13,2 sumuran: 13,2 mL secara total yang mengandung 38.000 × 13,2 = 501.600 sel.
- Suspensi: 501.600 ÷ 1.000.000 = 0,5016 mL. Medium segar: 13,2 − 0,5016 = 12,7 mL.
- Tuangkan 1 mL campuran ke setiap sumuran.
Ketika Suspensinya Terlalu Encer
Jika sel Anda berada pada 10.000 sel/mL, mendapatkan 38.000 sel ke dalam satu sumuran membutuhkan 3,8 mL suspensi, lebih banyak dari 1 mL yang dapat ditampung sumuran itu. Kalkulator menandainya alih-alih melaporkan jumlah medium yang negatif. Sentrifugasi sel dengan kecepatan rendah (Centrifuge RPM to RCF Calculator mengubah × g dari protokol menjadi rpm untuk rotor Anda), buang supernatannya dan suspensikan ulang dalam volume yang lebih kecil, lalu hitung lagi sebelum menanam.
Kesalahan Umum
- Menghitung sel mati. Tanam berdasarkan hitungan sel hidup, dan gunakan viabilitas dari hitungan dengan trypan blue.
- Mencampur satuan. Sel per cm² dan sel per sumuran berbeda 1,9 kali di pelat 24 sumuran. Periksa mana yang dimaksud protokol.
- Tidak mencampur ulang. Sel mengendap dalam hitungan menit, sehingga pipet yang diambil dari bagian atas tabung yang belum dicampur akan berisi sel yang sedikit.
- Menanam di sumuran tepi. Penguapan di sumuran luar pelat mengubah konsentrasi; banyak laboratorium mengisinya dengan buffer atau medium dan membiarkannya tidak ditanami.
- Melupakan pasase dan jenis sel. Kepadatan yang cocok untuk sel HeLa yang tumbuh cepat akan membuat lini sel yang lebih lambat atau yang terhambat oleh kontak menjadi terlalu padat.
Pertanyaan yang Sering Diajukan
- Bagaimana cara menghitung berapa sel yang ditanam per sumuran?
- Kalikan kepadatan target dalam sel/cm² dengan luas pertumbuhan sumuran dalam cm². Sumuran pelat 24 sumuran memiliki sekitar 1,9 cm², sehingga 20.000 sel/cm² berarti 38.000 sel per sumuran. Jika protokol Anda memberikan sel per sumuran secara langsung, masukkan angka itu.
- Bagaimana cara menghitung volume suspensi sel yang ditambahkan?
- Bagi jumlah sel yang Anda butuhkan dengan jumlah sel per mililiter dalam suspensi Anda. 38.000 sel dari suspensi 1 × 10⁶ sel/mL adalah 0,038 mL, atau 38 µL. Untuk banyak sumuran, buat satu campuran penanaman dan bagi.
- Berapa banyak sel yang sebaiknya ditanam dalam pelat 24 sumuran?
- Tabel Thermo Fisher menyarankan sekitar 50.000 sel per sumuran untuk sel HeLa, yaitu sekitar 26.000 sel/cm². Jumlah yang tepat bergantung pada lini sel dan berapa lama percobaan berlangsung: gunakan lebih sedikit sel untuk kultur yang lebih lama atau untuk sel yang tumbuh cepat, dan lebih banyak jika sel harus konfluen keesokan harinya.
- Berapa banyak sel dalam labu T-75 yang konfluen?
- Thermo Fisher mencantumkan sekitar 8,4 × 10⁶ sel HeLa saat konfluen dalam labu T-75 (75 cm²), kira-kira 112.000 sel/cm². Angka ini sangat bervariasi menurut jenis dan ukuran sel, jadi gunakan hanya sebagai panduan kasar.
- Mengapa perlu menambahkan volume ekstra ke campuran penanaman?
- Cairan hilang ke dinding tabung dan ujung pipet, sehingga campuran yang dibuat tepat untuk N sumuran membuat sumuran terakhir kekurangan. 10% tambahan adalah hal yang lazim; dengan hanya beberapa sumuran, buat campuran untuk satu sumuran tambahan sebagai gantinya.
- Apakah volume medium mengubah jumlah sel?
- Tidak. Jumlah sel per sumuran ditentukan oleh kepadatan dan luasnya. Volume tempat Anda menanam hanya mengubah seberapa encer sel itu, dan berapa banyak volume tersebut yang diisi suspensi.