세포 파종 계산기
플레이트, 접시 또는 플라스크를 고르고, 원하는 밀도를 cells/cm² 또는 웰당 세포 수로 정한 뒤, 세포 현탁액의 농도를 입력하세요. 계산기는 전체 파종 혼합액에 필요한 현탁액과 새 배지의 양, 각 웰에 넣을 양, 필요한 총 세포 수를 보여 줍니다. 모든 계산은 브라우저에서 이루어집니다. 무료이며 회원가입이 필요 없습니다.
용기 제조사의 수치가 표와 다르면 그 값을 사용하세요.
세포 계수(예: 혈구계)에서 얻은 값입니다.
파종 후 세포와 배지를 합한 양입니다.
피펫팅 손실을 보정합니다. 10%가 일반적입니다.
결과
0.5016
가져갈 세포 현탁액 (mL)
12.7
추가할 새 배지 (mL)
38,000
웰 또는 용기당 세포 수
38
웰 또는 용기당 현탁액 (µL)
501,600
필요한 총 세포 수
20,000
도달한 밀도 (cells/cm²)
파종 혼합액
| 구성 성분 | 부피 (mL) |
|---|---|
| 세포 현탁액 | 0.5016 |
| 새 배지 | 12.7 |
| 파종 혼합액 전체 | 13.2 |
부드럽게 섞은 뒤, 12개의 웰 또는 용기 각각에 1 mL씩 분주하세요.
계산 과정
용기당 세포 수 = 20,000 cells/cm² × 1.9 cm² = 38,000
현탁액 = 필요한 세포 수 ÷ 농도 = 501,600 ÷ 1 × 10⁶ = 0.5016 mL
세포 파종 계산기 사용 방법
- 1. 용기를 고르세요. 성장 면적은 계산기의 표에서 가져옵니다. 플레이트의 면적이 다르면 재정의 칸에 입력하세요.
- 2. 밀도를 정하세요. cells/cm²(형식을 바꿔 쓸 때 유용)나 웰당 세포 수(대부분의 프로토콜이 쓰는 방식)를 입력하세요. 용기 옆의 버튼은 Thermo Fisher의 시작 수를 채워 줍니다.
- 3. 현탁액을 입력하세요. 계수에서 얻은 농도를 사용하고, 세포를 넣은 뒤 각 웰에 원하는 총 부피를 입력하세요. 피펫팅 손실을 메우려면 여분의 혼합액을 추가하세요.
- 4. 파종 혼합액을 만드세요. 표시된 현탁액과 새 배지의 양을 합치고, 부드럽게 섞은 뒤, 모든 웰에 같은 양을 분주하세요.
계산 방법
웰당 세포 수
웰당 세포 수 = 밀도(cells/cm²) × 성장 면적(cm²)
현탁액
현탁액 부피(mL) = 필요한 총 세포 수 ÷ 현탁액의 cells/mL
배지
새 배지 = 파종 혼합액의 부피 − 현탁액
파종 혼합액은 모든 웰을 위해 한 튜브에서 만들며, 마지막 웰이 모자라지 않도록 N × (1 + 여분) 개의 웰분을 만듭니다. 현탁액은 그중 작은 부분만 차지합니다. 세포를 각 웰에 하나씩 넣는 대신 혼합액 하나를 만들어 분주하면 더 빠르고 웰 간 균일성도 훨씬 높습니다. 먼저 현탁액을 계수하세요(혈구계 세포 수 계산기는 사각형 계수를 cells/mL로 바꿔 줍니다). 세포는 금방 가라앉으므로 매 단계 전에 충분히 다시 현탁하세요.
성장 면적과 시작 수
계산기의 용기 표는 Thermo Fisher Scientific의 Useful Numbers for Cell Culture (Gibco Cell Culture Basics)에서 가져왔으며, 시작 수는 HeLa 세포로 측정된 값입니다. 대표적인 값은 다음과 같습니다:
| 용기 | 성장 면적 (cm²) | 시작 수 | 성장 배지 (mL) |
|---|---|---|---|
| 6웰 플레이트 | 9.6 | 웰당 0.3 × 10⁶ | 1–3 |
| 12웰 플레이트 | 3.5 | 웰당 0.1 × 10⁶ | 1–2 |
| 24웰 플레이트 | 1.9 | 웰당 0.05 × 10⁶ | 0.5–1.0 |
| 96웰 플레이트 | 0.32 | 웰당 0.01 × 10⁶ | 0.1–0.2 |
| 100 mm 접시 | 56.7 | 2.2 × 10⁶ | 12 |
| T-75 플라스크 | 75 | 2.1 × 10⁶ | 8–15 |
시작 수는 출발점일 뿐 규칙이 아닙니다. 적절한 밀도는 세포 종류, 실험 기간, 분열 속도에 따라 다릅니다. 성장 면적도 제조사마다 조금씩 다르므로 제품 설명서를 확인하고, 용기의 수치가 다르면 면적을 재정의하세요. Corning이 제시하는 플라스크와 접시용 배지 양 0.2–0.3 mL/cm²는 유용한 교차 확인 기준이지만, 메니스커스가 비율을 바꾸는 마이크로플레이트의 작은 웰에는 적용되지 않습니다.
실제 예시: 24웰 플레이트의 12개 웰
1 × 10⁶ cells/mL 현탁액에서 24웰 플레이트의 12개 웰에 각각 1 mL를 채우고, 20,000 cells/cm²와 10% 여분 혼합(계산기의 기본값)으로 파종하려 합니다.
- 웰당 세포 수: 20,000 × 1.9 = 38,000, 즉 웰당 현탁액 38 µL.
- 12 × 1.1 = 13.2개 웰분의 혼합액: 총 13.2 mL, 세포 38,000 × 13.2 = 501,600개.
- 현탁액: 501,600 ÷ 1,000,000 = 0.5016 mL. 새 배지: 13.2 − 0.5016 = 12.7 mL.
- 혼합액 1 mL를 각 웰에 분주하세요.
현탁액이 너무 묽을 때
세포가 10,000 cells/mL라면 한 웰에 38,000개를 넣으려면 3.8 mL의 현탁액이 필요한데, 이는 웰이 담는 1 mL보다 많습니다. 계산기는 음수인 배지 양을 보고하는 대신 이를 표시합니다. 세포를 약한 속도로 원심분리해 가라앉히고, 상층액을 버린 뒤 더 적은 부피에 다시 현탁하고, 파종 전에 다시 세세요. (원심분리기 RPM-RCF 계산기는 프로토콜의 × g를 사용 중인 로터의 rpm으로 바꿔 줍니다.)
흔한 실수
- 죽은 세포를 세기. 생존율은 트립판 블루 계수에서 얻고, 살아 있는 세포 수를 기준으로 파종하세요.
- 단위 혼동. 24웰 플레이트에서 cells/cm²와 웰당 세포 수는 1.9배 차이가 납니다. 프로토콜이 어느 것을 뜻하는지 확인하세요.
- 다시 섞지 않기. 세포는 몇 분 안에 가라앉으므로, 섞지 않은 튜브의 위쪽에서 뽑은 피펫에는 세포가 적습니다.
- 가장자리 웰에 파종하기. 플레이트 바깥쪽 웰은 증발 때문에 농도가 바뀌므로, 많은 실험실은 이 웰을 완충액이나 배지로 채우고 파종하지 않습니다.
- 계대와 세포 종류를 잊기. 빠르게 자라는 HeLa 세포에 맞는 밀도는 느리게 자라거나 접촉 억제를 보이는 세포주를 과밀하게 만듭니다.
자주 묻는 질문
- 웰당 파종할 세포 수는 어떻게 계산하나요?
- 목표 밀도(cells/cm²)에 웰의 성장 면적(cm²)을 곱하세요. 24웰 플레이트의 한 웰은 약 1.9 cm²이므로, 20,000 cells/cm²는 웰당 38,000개입니다. 프로토콜이 웰당 세포 수를 직접 주면 그 값을 입력하세요.
- 넣을 세포 현탁액의 부피는 어떻게 계산하나요?
- 필요한 세포 수를 현탁액의 mL당 세포 수로 나누세요. 1 × 10⁶ cells/mL 현탁액에서 38,000개는 0.038 mL, 즉 38 µL입니다. 웰이 많다면 파종 혼합액을 하나 만든 뒤 나누세요.
- 24웰 플레이트에는 세포를 얼마나 파종해야 하나요?
- Thermo Fisher의 표는 HeLa 세포의 경우 웰당 약 50,000개, 즉 약 26,000 cells/cm²를 제안합니다. 적정 수는 세포주와 실험 기간에 따라 다릅니다. 장기 배양이나 빠르게 자라는 세포에는 적게, 다음 날 합류 상태가 되어야 한다면 많이 쓰세요.
- T-75 플라스크에서 합류 상태의 세포 수는 얼마인가요?
- Thermo Fisher는 T-75 플라스크(75 cm²)에서 합류 시 HeLa 세포 약 8.4 × 10⁶개, 약 112,000 cells/cm²라고 제시합니다. 세포 종류와 크기에 따라 많이 달라지므로 대략적인 기준으로만 사용하세요.
- 파종 혼합액에 여분의 부피를 더하는 이유는 무엇인가요?
- 액체는 튜브 벽과 피펫 팁에 남으므로, 정확히 N개 웰분만 만든 혼합액은 마지막 웰이 모자랍니다. 보통 10%를 여분으로 더하며, 웰이 몇 개뿐이라면 웰 하나분을 더 만드세요.
- 배지의 부피가 세포 수를 바꾸나요?
- 아닙니다. 웰당 세포 수는 밀도와 면적으로 정해집니다. 파종 부피는 세포가 얼마나 묽은지, 그리고 현탁액이 그 부피의 얼마를 차지하는지만 바꿉니다.