Calculadora de siembra celular
Elige la placa, el plato o el frasco, indica la densidad que quieres como células por cm² o como células por pocillo e introduce la concentración de tu suspensión celular. La calculadora devuelve el volumen de suspensión y de medio fresco para toda la mezcla de siembra, cuánto poner en cada pocillo y el número total de células que necesitas. Se ejecuta por completo en tu navegador. Gratis, sin registro.
Usa la cifra de tu fabricante de recipientes si difiere de la tabla.
Procede de tu recuento celular, por ejemplo con un hemocitómetro.
Células más medio una vez sembradas.
Cubre las pérdidas al pipetear; un 10 % es habitual.
Resultados
0,5016
Suspensión celular que hay que tomar (mL)
12,7
Medio fresco que hay que añadir (mL)
38.000
Células por pocillo o recipiente
38
Suspensión por pocillo o recipiente (µL)
501.600
Células totales necesarias
20.000
Densidad alcanzada (células/cm²)
Mezcla de siembra
| Componente | Volumen (mL) |
|---|---|
| Suspensión celular | 0,5016 |
| Medio fresco | 12,7 |
| Mezcla de siembra total | 13,2 |
Mezcla con suavidad y reparte 1 mL en cada uno de los 12 pocillos o recipientes.
El cálculo
células por recipiente = 20.000 células/cm² × 1,9 cm² = 38.000
suspensión = células necesarias ÷ concentración = 501.600 ÷ 1 × 10⁶ = 0,5016 mL
Cómo usar la calculadora de siembra celular
- 1. Elige el recipiente. El área de crecimiento viene de la tabla de la calculadora. Si el área de tu placa es distinta, escríbela en la casilla de corrección.
- 2. Indica la densidad. Introduce las células por cm² (útil cuando cambias de formato) o las células por pocillo, que es como suelen expresarlas muchos protocolos. El botón junto al recipiente rellena el número inicial de Thermo Fisher.
- 3. Introduce la suspensión. Usa la concentración de tu recuento y el volumen total que quieres en cada pocillo una vez sembradas las células. Añade mezcla extra para cubrir las pérdidas al pipetear.
- 4. Prepara la mezcla de siembra. Combina los volúmenes indicados de suspensión y de medio fresco, mezcla con suavidad y reparte la misma cantidad en cada pocillo.
El cálculo
Células por pocillo
células por pocillo = densidad (células/cm²) × área de crecimiento (cm²)
Suspensión
volumen de suspensión (mL) = células totales necesarias ÷ células/mL de la suspensión
Medio
medio fresco = volumen de la mezcla de siembra − suspensión
La mezcla de siembra se prepara en un solo tubo para todos los pocillos, para N × (1 + extra) pocillos, de modo que el último no quede corto, y la suspensión es solo una pequeña parte de ella. Preparar una única mezcla y repartirla, en lugar de añadir las células a cada pocillo por separado, es más rápido y produce pocillos mucho más uniformes. Cuenta primero la suspensión (una calculadora de recuento celular con hemocitómetro convierte los recuentos de cuadrículas en células/mL) y resuspéndela bien antes de cada paso, porque las células sedimentan con rapidez.
Áreas de crecimiento y números iniciales
La tabla de recipientes de la calculadora procede de Useful Numbers for Cell Culture (Gibco Cell Culture Basics), de Thermo Fisher Scientific, donde los números iniciales se midieron con células HeLa. Valores representativos:
| Recipiente | Área de crecimiento (cm²) | Número inicial | Medio de cultivo (mL) |
|---|---|---|---|
| Placa de 6 pocillos | 9,6 | 0,3 × 10⁶ por pocillo | 1–3 |
| Placa de 12 pocillos | 3,5 | 0,1 × 10⁶ por pocillo | 1–2 |
| Placa de 24 pocillos | 1,9 | 0,05 × 10⁶ por pocillo | 0,5–1,0 |
| Placa de 96 pocillos | 0,32 | 0,01 × 10⁶ por pocillo | 0,1–0,2 |
| Plato de 100 mm | 56,7 | 2,2 × 10⁶ | 12 |
| Frasco T-75 | 75 | 2,1 × 10⁶ | 8–15 |
Considera los números iniciales como un punto de partida, no como una regla: la densidad adecuada depende del tipo celular, de cuánto dure el experimento y de la rapidez con que se dividan las células. Las áreas también difieren un poco entre fabricantes, así que consulta la ficha del producto y corrige el área cuando la de tu recipiente sea distinta. La recomendación de Corning de 0,2–0,3 mL de medio por cm² es una buena comprobación para frascos y platos, aunque no se aplica a los pocillos pequeños de las microplacas, donde el menisco cambia la proporción.
Ejemplo desarrollado: doce pocillos de una placa de 24
Quieres 20.000 células/cm² en doce pocillos de una placa de 24, cada uno lleno hasta 1 mL, a partir de una suspensión de 1 × 10⁶ células/mL, con un 10 % de mezcla extra (los valores por defecto de la calculadora).
- Células por pocillo: 20.000 × 1,9 = 38.000, es decir, 38 µL de suspensión por pocillo.
- Mezcla para 12 × 1,1 = 13,2 pocillos: 13,2 mL en total, con 38.000 × 13,2 = 501.600 células.
- Suspensión: 501.600 ÷ 1.000.000 = 0,5016 mL. Medio fresco: 13,2 − 0,5016 = 12,7 mL.
- Reparte 1 mL de la mezcla en cada pocillo.
Cuando la suspensión está demasiado diluida
Si tus células están a 10.000 células/mL, para meter 38.000 en un pocillo hacen falta 3,8 mL de suspensión, más de los 1 mL que caben en él. La calculadora lo señala en lugar de dar una cantidad negativa de medio. Centrifuga las células a una velocidad suave (la calculadora de RPM a FCR para centrífugas convierte los × g de un protocolo a las rpm de tu rotor), descarta el sobrenadante y resuspéndelas en un volumen menor; después vuelve a contarlas antes de sembrar.
Errores comunes
- Contar células muertas. Siembra según el recuento de células vivas, y usa la viabilidad del recuento con azul de tripano.
- Mezclar unidades. Células por cm² y células por pocillo difieren en un factor de 1,9 en una placa de 24 pocillos. Comprueba cuál pide el protocolo.
- No resuspender. Las células sedimentan en minutos, así que una pipeta tomada de la parte superior de un tubo sin mezclar lleva pocas células.
- Sembrar los pocillos del borde. La evaporación en los pocillos exteriores de una placa cambia las concentraciones; muchos laboratorios los llenan de tampón o de medio y los dejan sin sembrar.
- Olvidar el pase y el tipo celular. Una densidad que va bien a las células HeLa, de crecimiento rápido, sobrecrecerá a líneas más lentas o con inhibición por contacto.
Preguntas frecuentes
- ¿Cómo se calcula cuántas células sembrar por pocillo?
- Multiplica la densidad objetivo en células/cm² por el área de crecimiento del pocillo en cm². Un pocillo de una placa de 24 tiene unos 1,9 cm², así que 20.000 células/cm² equivalen a 38.000 células por pocillo. Si tu protocolo da las células por pocillo directamente, introdúcelas.
- ¿Cómo se calcula el volumen de suspensión celular que hay que añadir?
- Divide el número de células que necesitas entre las células por mililitro de tu suspensión. 38.000 células de una suspensión de 1 × 10⁶ células/mL son 0,038 mL, o 38 µL. Si son muchos pocillos, prepara una sola mezcla de siembra y repártela.
- ¿Cuántas células debo sembrar en una placa de 24 pocillos?
- La tabla de Thermo Fisher sugiere unas 50.000 células por pocillo para células HeLa, lo que equivale a unas 26.000 células/cm². El número adecuado depende de la línea celular y de cuánto dure el experimento: usa menos células para un cultivo más largo o para células de crecimiento rápido, y más si las células deben estar confluentes al día siguiente.
- ¿Cuántas células hay en un frasco T-75 confluente?
- Thermo Fisher indica unas 8,4 × 10⁶ células HeLa en confluencia en un frasco T-75 (75 cm²), unas 112.000 células/cm². Varía mucho según el tipo y el tamaño celular, así que úsalo solo como guía aproximada.
- ¿Por qué añadir volumen extra a la mezcla de siembra?
- El líquido se queda en las paredes del tubo y en la punta de la pipeta, así que una mezcla preparada exactamente para N pocillos deja corto al último. Un 10 % extra es habitual; con pocos pocillos, prepara la mezcla para un pocillo más.
- ¿Cambia el volumen de medio el número de células?
- No. El número de células por pocillo lo fijan la densidad y el área. El volumen en el que siembras solo cambia lo diluidas que están las células y qué parte de ese volumen ocupa la suspensión.